染色体原位杂交检测服务免费咨询「科锐诺」 [科锐诺)]"内容： 近年来基因检测在结1核病诊断中应用越来越广泛，但主要应用于痰液等新鲜标本，在石蜡包埋组织标本中应用非常少。我们建立了利用荧光定量PCR及膜探针杂交法鉴别诊断结1核病与非结1核分枝杆1菌病的分子病理检测方法；建立了利用高分辨溶解曲线法检测1线抗结1核核1心药1物利福平及异烟肼的耐药情况的分子病理检测方法。我们在首都临床医学发展专项的资助下进行大样本临床验证。这些方法也将陆续转化为我院分子病理诊断项目。
目前，我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、PCR、荧光定量PCR、基因芯片和DNA测序技术DNA原位杂交主要用于基因定位、特异基因(如病原微生物基因)检测等;RNA原位杂交则用于基因表达检测。原位杂交技术的优点是操作简单，可直接定位组织，价格低廉，信号稳定，储存方便，可做组织学评价，是目前应用较多的分子病理技术之一。
应用于分子病理诊断的DNA测序技术有直接测序法和焦磷酸测序法。直接测序技术主要是Sanger等发明的双脱氧链末端终止法。其原理就是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A、T、C、G4组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DNA序列。直接测序法是基因突变检测的“金标准”，其优点是结果准确，重复性好，可检测整个测序范围内已知和未知突变点;缺点是步骤多，耗时长，灵敏度低，过程不易控制，在检测已知突变位点方面将逐渐被荧光定量PCＲ法替代。
荧光原位杂交技（fish）原理：是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技（fish）实验步骤：
1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。
2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。
3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min，风干，DEPC水浸泡。
5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。
以上信息由专业从事染色体原位杂交检测服务的科锐诺于2025/4/22 11:52:58发布
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