湖北植物组织原位杂交信赖推荐「贝科新肽」

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原位杂交技术原位杂交技术（In Situ Hybridization, ISH）是一种在生物样本（如组织切片、细胞涂片等）的原始位置上，通过核酸分子间的碱基互补配对原理，检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。它能保留目标核酸在样本中的空间分布信息，是研究基因表达定位、染色体结构及病原体等的重要工具。一、技术原理原位杂交的原理是核酸分子的碱基互补配对：

探针设计：人工合成与目标核酸（DNA 或 RNA）序列互补的单链核酸片段（称为 “探针”），并对探针进行标记（如荧光、生物素等）。杂交反应：将标记的探针与经过处理的样本（含待检测核酸）孵育，探针通过碱基互补配对（A-T/U、G-C）与目标核酸特异性结合，形成杂交复合物。信号检测：通过检测探针上的标记物（如荧光信号、显色信号），定位目标核酸在样本中的位置和表达强度。

关键组成要素1. 探针探针是与目标核酸互补的核酸片段，是原位杂交的 “检测工具”，其设计直接影响技术的特异性和灵敏度：

类型：根据目标核酸类型可分为 DNA 探针、RNA 探针（cRNA 探针）、寡核苷酸探针等。标记方式：性标记（如 ³²P、³⁵S）：灵敏度高，但需防护，已逐渐被非性标记替代；非性标记：如荧光素（FITC、Cy3）、生物素、等，安全性高，易检测。2. 样本需保留核酸的原始位置和结构，常见样本类型：

组织切片（冷冻切片或石蜡包埋切片）；细胞涂片、爬片；染色体标本（用于染色体原位杂交）。3. 杂交条件杂交温度、盐浓度、探针浓度等需优化，以确保探针与目标核酸、特异性结合（避免非特异性杂交）。

实验步骤（以石蜡组织切片 RNA 原位杂交为例）样本制备组织固定：用甲醛等固定剂保存组织形态和核酸（避免 RNA 降解）；包埋与切片：将固定组织石蜡包埋，切成 5-10μm 薄片并贴附于载玻片。预处理脱蜡：用、乙醇去除石蜡，暴露组织；通透处理：用蛋白酶 K 等消化组织蛋白，增加探针对细胞的穿透性；变性（仅 DNA 原位杂交）：高温使 DNA 双链解旋为单链（RNA 原位杂交无需此步骤，因 RNA 为单链）。

探针杂交将标记的探针溶液滴加于样本，在适宜温度（如 37-65℃）下孵育数小时至过夜，使探针与目标 RNA 特异性结合。洗涤用不同浓度的盐溶液洗涤样本，去除未结合的游离探针，降低背景信号。信号检测若为荧光探针：直接用荧光显微镜观察荧光信号；若为生物素 / 探针：通过亲和素 - 生物素复合物或结合标记物，再用酶（如辣根过氧化物酶）催化显色剂（如 DAB）产生可见信号。结果分析观察信号的位置（如细胞内、组织区域）、强度和分布，结合形态学特征解读结果。

以上信息由专业从事植物组织原位杂交的贝科新肽于2025/8/27 14:48:35发布

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