荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ
Hybridization，FISH）利用核酸分子单链之间互补的碱基序列，通过标记的核酸探针与目标DNA或RNA进行杂交，进而定位和检测特定DNA序列的技术。探针标记可以采用荧光、或者生物素。FISH技术的基本原理是使用已知的标记单链核酸作为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行杂交，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因此可以通过探针直接与染色体进行杂交，从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的性标记原位杂交相比，FISH技术具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点。该方法适用于植物染色体检测、土壤（泥巴）中细菌检测。
关键组成要素1. 探针探针是与目标核酸互补的核酸片段，是原位杂交的 “检测工具”，其设计直接影响技术的特异性和灵敏度：
类型：根据目标核酸类型可分为 DNA 探针、RNA 探针（cRNA 探针）、寡核苷酸探针等。标记方式：性标记（如 ³²P、³⁵S）：灵敏度高，但需防护，已逐渐被非性标记替代；非性标记：如荧光素（FITC、Cy3）、生物素、等，安全性高，易检测。2. 样本需保留核酸的原始位置和结构，常见样本类型：
组织切片（冷冻切片或石蜡包埋切片）；细胞涂片、爬片；染色体标本（用于染色体原位杂交）。3. 杂交条件杂交温度、盐浓度、探针浓度等需优化，以确保探针与目标核酸、特异性结合（避免非特异性杂交）。
原位杂交技术自 1969 年由 Pardue 和 Gall 建立以来，不断优化：
从性标记发展为荧光标记（FISH），实现了多重标记和高分辨率成像；结合共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜，进一步提升了信号检测的精度；与测序技术结合（如原位测序），可在原位获取高通量核酸序列信息，为空间转录组学等领域提供了强大工具。
原位杂交技术凭借 “空间定位” 的优势，在分子生物学、医学诊断和生命科学研究中占据重要地位，是连接分子水平与形态学水平的关键桥梁。
以上信息由专业从事染色体原位杂交的贝科新肽于2025/8/19 19:01:59发布
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