原位杂交技术原位杂交技术(In Situ Hybridization, ISH)是一种在生物样本(如组织切片、细胞涂片等)的原始位置上,通过核酸分子间的碱基互补配对原理,检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。它能保留目标核酸在样本中的空间分布信息,是研究基因表达定位、染色体结构及病原体等的重要工具。一、技术原理原位杂交的原理是核酸分子的碱基互补配对:
探针设计:人工合成与目标核酸(DNA 或 RNA)序列互补的单链核酸片段(称为 “探针”),并对探针进行标记(如荧光、生物素等)。杂交反应:将标记的探针与经过处理的样本(含待检测核酸)孵育,探针通过碱基互补配对(A-T/U、G-C)与目标核酸特异性结合,形成杂交复合物。信号检测:通过检测探针上的标记物(如荧光信号、显色信号),定位目标核酸在样本中的位置和表达强度。
原位杂交技术自 1969 年由 Pardue 和 Gall 建立以来,不断优化:
从性标记发展为荧光标记(FISH),实现了多重标记和高分辨率成像;结合共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜,进一步提升了信号检测的精度;与测序技术结合(如原位测序),可在原位获取高通量核酸序列信息,为空间转录组学等领域提供了强大工具。
原位杂交技术凭借 “空间定位” 的优势,在分子生物学、医学诊断和生命科学研究中占据重要地位,是连接分子水平与形态学水平的关键桥梁。以上信息由专业从事ISH的贝科新肽于2025/8/16 12:35:29发布
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