原位杂交技术（in situhybridization）是以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。
可以检测cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各种种属的标本，包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。
DNA 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比，DNA探针与靶mRNA 分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无法正确检测。
同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素：温度、光照、湿度和试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率；光照影响着荧光染料的强度，所以探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存；各种试剂pH也要达到要求，这也直接关系到原位杂交的稳定性。
原位杂交技术的应用领域
原位杂交技术在医学、农业和工业等领域都有广泛的应用。在医学方面，原位杂交技术可用于检测癌细胞、病毒和细菌等致病微生物，帮助医生制定的诊断和方案。在农业方面，原位杂交技术可用于基因定位、品种鉴定和遗传育种等领域，提高农作物的产量和品质。在工业方面，原位杂交技术可用于检测基因工程产品中的外源DNA，保证产品的安全性和稳定性。
以上信息由专业从事荧光原位杂交的贝科新肽于2025/5/5 16:52:46发布
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