DNA 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比，DNA探针与靶mRNA 分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无法正确检测。
怎样保证原位杂交实验操作时的温度?
建议仪器操作，人工操作的话要注意：
（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。
（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。
（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。
（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。
同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素：温度、光照、湿度和试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率；光照影响着荧光染料的强度，所以探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存；各种试剂pH也要达到要求，这也直接关系到原位杂交的稳定性。
原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用，例如：
动物行为学研究：在动物行为学中，原位杂交技术可以用于检测动物行为与基因表达之间的关系。例如，通过比较不同行为状态下动物脑组织中基因表达的差异，可以揭示特定基因对动物行为的影响。
生物技术应用：原位杂交技术在生物技术领域也有广泛应用，例如在基因、基因编辑和开发等方面。例如，通过原位杂交技术可以定位和特定基因，为基因和基因编辑提供基础数据和工具。
以上信息由专业从事原位杂交检测的贝科新肽于2025/3/30 9:11:42发布
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