原位杂交第三天
1） 用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。
3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。
4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位杂交技术的技术流程
原位杂交技术的技术流程包括样本处理、探针制备、杂交反应和信号检测等步骤。样本处理包括组织或细胞的固定、包埋、切片和脱氧核糖核酸酶消化等步骤，目的是保持组织或细胞的原始结构和核酸序列的完整性。探针制备包括标记探针、纯化和变性等步骤，目的是提高探针的特异性和敏感性。杂交反应包括预杂交、杂交和洗脱等步骤，目的是使探针与目标核酸序列形成双链复合物。信号检测包括显色反应、荧光染色和性同位素标记等步骤，目的是可视化目标核酸序列的分布。
植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面：
1. 制备组织样品：从植物中取出需要研究的组织样品，如根、茎、叶等。
2. 固定组织样品：将组织样品固定在载玻片上，通常使用或乙醇等化学物质进行固定。
3. 处理组织样品：对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理，以便于DNA探针的穿透和结合。
4. 制备DNA探针：根据需要研究的基因序列，设计并合成DNA探针。DNA探针可以标记荧光染料或性同位素，以便于检测。
5. 杂交DNA探针：将DNA探针与组织样品进行杂交，通常需要在高温下进行，以便于DNA探针与RNA或DNA结合。
6. 检测杂交信号：通过荧光显微镜或计数器等设备，检测DNA探针与RNA或DNA的结合情况，确定目标基因的表达模式和位置。
以上信息由专业从事原位杂交公司的贝科新肽于2025/3/7 16:30:10发布
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