原位杂交:
原位杂交是指用特定探针定位、检测DNA、RNA的一种有效的实验方法,通过把特点序列客隆到特殊载体上,通过转录酶反转一条天然的RNA探针,将探针和切片样品进行杂交,通过一系列显色方法,来确定RNA或者DNA表达区域;本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记,灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒,GISH/ISH/FISH按照探针进行收费,每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片,收费为1万5千元,GISH杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量大优惠!
怎样保证原位杂交实验操作时的温度?
建议仪器操作,人工操作的话要注意:
(1)对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查,不符合要求的进行更换。
(2)尽可能地保持环境温度在20度以上。
(3)针对需要预热以达到要求温度的试剂,在使用前必须使用温度计对其进行测温。
(4)同时检测的样本不超过4块,操作一定要迅速,实验人员要注意一些小部件的温度,尤其是在冬季。
原位杂交第三天
1) 用1ml含10%热灭清的MABT溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlMABT置换,25分钟,再用1mlMABT溶液置换,一小时以上,后用1mlMABT溶液置换,25分钟。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
FISH技术的基本步骤包括探针制备、样品预处理、探针与样品的杂交、信号检测和图像分析等。在探针制备过程中,使用荧光标记物代替同位素标记物来标记探针。在样品预处理过程中,细胞或组织的固定、裂解和去除非特异性蛋白质等操作都是必要的,以提高探针与目标序列的亲和力和特异性。在探针与样品的杂交过程中,探针与样品中的目标序列进行互补性杂交,形成可检测的荧光信号。在信号检测和图像分析过程中,使用高灵敏度荧光显微镜检测荧光信号并获取高分辨率的细胞图像。以上信息由专业从事荧光原位杂交的贝科新肽于2024/12/17 7:41:35发布
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