为什么不先对一个基因做预测，在预测的结果上直接做共定位？
不同的预测网站有不同的计算方法，同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的，对于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推荐先做普通定位，根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮？
不同物种的细胞可能对基因表达有影响，当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时，可以考虑换一种受体材料。另外，如果是分泌蛋白，在原生质体中无法观察到荧光，此时可以考虑注射叶片来观察荧光。
拍摄时为什么有明场通道？
（1）显示细胞状态，有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的，变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
（2）显示荧光确实是细胞内蛋白表达的，而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。
内质网
内质网是细胞中的一个复杂网络，它负责合成和转运蛋白质。为了定位内质网，我们可以使用一种名为GFP-HDEL的蛋白质来标记它们。GFP-HDEL是一种带有绿色荧光的蛋白质，它可以与内质网上的HDEL序列结合。在洋葱细胞中，内质网通常位于细胞的中央或周围。
高尔基体
高尔基体是细胞中的另一个复杂网络，它负责合成和转运蛋白质。为了定位高尔基体，我们可以使用一种名为FM4-64的化合物来标记它们。FM4-64可以穿过细胞膜并进入高尔基体，从而发出红色荧光。在洋葱细胞中高尔基体通常位于细胞的中央或周围。
基因法转化洋葱表皮细胞：
分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1 μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。
双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC）是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的强大技术。它利用荧光蛋白的特性，将两个不同的荧光蛋白片段（通常是黄色荧光蛋白和绿色荧光蛋白）分别与两个不同的蛋白质结合，以检测它们之间的相互作用。
BiFC的原理是基于荧光蛋白的特性，这些荧光蛋白可以发射出特定的光子，从而在细胞中产生荧光信号。当两个不同的荧光蛋白片段结合在一起时，它们会形成一个完整的荧光蛋白，并发出更强的荧光信号。因此，通过观察荧光信号的强度和分布，我们可以推断出两个蛋白质是否相互作用以及相互作用的确切位置。
以上信息由专业从事BIFC的贝科新肽于2024/12/14 7:55:46发布
转载请注明来源：http://wuhan.mf1288.com/bkxtbio-2824796792.html
