将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。
杂交结束后，去除杂交液，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
怎样保证原位杂交实验操作时的温度?
建议仪器操作，人工操作的话要注意：
（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。
（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。
（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。
（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。
原位杂交第二天
1.
1）将探针回收，放于－20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。
3）置换2XSSCT1ml，60℃，放置15分钟。
4）置换0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。
2.
1）用MABT洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。
2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4C 冰箱过夜。
植物染色体原位杂交是一种重要的分子生物学技术，它可以用来研究植物基因组的结构和功能。该技术利用DNA探针与目标DNA序列的互补性结合，通过荧光或性标记来检测目标DNA序列在染色体上的位置和数量。
植物染色体原位杂交技术的基本原理是将DNA探针标记上荧光或性同位素，然后将其与目标DNA序列进行杂交。在杂交过程中，探针与目标DNA序列互补结合，形成稳定的双链DNA分子。随后，通过荧光或性同位素探测技术，可以检测到目标DNA序列在染色体上的位置和数量。
以上信息由专业从事荧光原位杂交的贝科新肽于2024/4/28 5:47:47发布
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