将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。
杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
原位杂交技术的应用领域
原位杂交技术在医学、农业和工业等领域都有广泛的应用。在医学方面,原位杂交技术可用于检测癌细胞、病毒和细菌等致病微生物,帮助医生制定的诊断和方案。在农业方面,原位杂交技术可用于基因定位、品种鉴定和遗传育种等领域,提高农作物的产量和品质。在工业方面,原位杂交技术可用于检测基因工程产品中的外源DNA,保证产品的安全性和稳定性。
原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用,例如:
植物学研究:在植物学研究中,原位杂交技术可以用于检测和定位特定基因的表达,研究基因组结构和进化。此外,还可以应用于植物染色体组型分析、基因组印记研究等方面。
微生物学研究:在微生物学领域,原位杂交技术可以用于研究细菌、病毒等微生物的基因表达和定位,以及它们在环境中的分布和相互作用。例如,通过标记特异性探针,可以检测肠道微生物群落中的特定,研究其在人体健康和疾病发生中的作用。
以上信息由专业从事植物组织原位杂交的贝科新肽于2024/4/27 6:16:23发布
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