菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜
（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。
（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤（1）。
（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。
（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。
（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定DNA。
（6） 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。
怎样保证原位杂交实验操作时的温度?
建议仪器操作，人工操作的话要注意：
（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。
（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。
（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。
（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。
原位杂交技术还在以下生物领域有应用：
生态学和环境科学：在生态学和环境科学领域，原位杂交技术可以用于研究生物与环境之间的相互作用。例如，通过标记特定基因的探针，可以检测环境中微生物种群的分布和变化，进而研究其对环境的影响和作用。
进化生物学：在进化生物学领域，原位杂交技术可以用于研究物种之间的遗传差异和进化关系。例如，通过比较不同物种之间基因序列的差异，可以揭示物种之间的亲缘关系和进化历程。
生物领域应用原位杂交技术的例子：
基因表达和调控研究：原位杂交技术可以用于研究基因表达的调控机制。例如，可以标记特定基因的探针，检测该基因在不同环境、不同生长条件下的表达情况，进而研究其表达调控机制。
细胞分化与发育研究：在细胞分化与发育研究中，原位杂交技术常被用于检测和定位特定基因的表达情况，进而了解细胞分化的过程和机制。例如，可以标记与细胞分化相关的基因探针，检测该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。
以上信息由专业从事荧光原位杂交技术的贝科新肽于2024/4/17 10:45:32发布
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