把滤膜放在纸巾上于室温晾干后,把滤膜(编号面朝上)放在一张保鲜膜上,并在保鲜膜上作几个不对称的标记,以使滤膜与性自显影片位置对应。
用第二张保鲜膜盖住滤膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。
底片显影后,在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置,同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸,通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。
①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;②组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测;③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;④基因在染色体上的定位;⑤检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些的诊断和生物学剂量测定等。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是在已有的性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性DNA分子原位杂交技术。它利用荧光标记的核酸片段为探针,与染色体上或DNA显微切片上的特异fl-N:~行杂交,通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号DNA序列在染色体或DNA显微切片上的目的DNA序列,进而确定其杂交位点。FISH技术检测时间短,检测灵敏度高,无污染,已广泛应用于染色体的鉴定、基因定位和异常染色体检测等领域。生物领域应用原位杂交技术的例子:
基因表达和调控研究:原位杂交技术可以用于研究基因表达的调控机制。例如,可以标记特定基因的探针,检测该基因在不同环境、不同生长条件下的表达情况,进而研究其表达调控机制。
细胞分化与发育研究:在细胞分化与发育研究中,原位杂交技术常被用于检测和定位特定基因的表达情况,进而了解细胞分化的过程和机制。例如,可以标记与细胞分化相关的基因探针,检测该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。
以上信息由专业从事荧光原位杂交技术的贝科新肽于2024/4/30 8:20:04发布
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