把滤膜放在纸巾上于室温晾干后，把滤膜（编号面朝上）放在一张保鲜膜上，并在保鲜膜上作几个不对称的标记，以使滤膜与性自显影片位置对应。
用第二张保鲜膜盖住滤膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。
底片显影后，在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置，同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸，通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。
DNA 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比，DNA探针与靶mRNA 分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无法正确检测。
原位杂交是一种生物学技术，它可以在细胞或组织中特定部位检测DNA或RNA的存在，而不需要将DNA或RNA分离出来。这项技术使用标记的DNA或RNA探针，与细胞或组织中的相应DNA或RNA进行特异性结合，然后通过光学显微镜或电子显微镜观察探针的位置和数量。
原位杂交的原理很简单。DNA或RNA分子具有互补的核苷酸序列，因此可以通过氢键相互结合。将标记的DNA或RNA探针与细胞中的DNA或RNA进行杂交，可以特异性地检测这些探针的位置和数量。探针的数量和位置可以反映DNA或RNA在细胞中的水平和分布。
生物领域应用原位杂交技术的例子：
物种进化与系统发生学研究：在物种进化与系统发生学研究中，原位杂交技术可以用于检测物种之间的亲缘关系和进化历程。例如，可以比较不同物种之间特定基因序列的差异，进而研究它们的亲缘关系和进化历程。
原位杂交技术在基因表达和调控、细胞分化与发育、研究和物种进化与系统发生学等领域都有广泛的应用价值，为深入探究生命现象、促进生物技术的发展提供了有力的技术支持。
以上信息由专业从事原位杂交试剂的贝科新肽于2024/4/17 9:59:06发布
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