如何评价和选择支原体检测试剂盒
1. 灵敏度。
灵敏度常用支原体基因组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。
2. 特异性和广谱性。
质量好的试剂盒应检测的支原体物种越多越多,并且特异性强,即只针对支原体,不针对其他细菌等微生物,没有交叉反应。
3. 稳定性。
冻干粉比液体试剂的稳定性高。
4. 样本类型及样本处理。
一款好的试剂盒,会标出它适合的样本类型,也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有抑制PCR反应的物质,因此需要处理。
5. 对照品。
一个好的试剂盒,会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有抑制PCR的物质,则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性抑制,因此支原体条带越强,内控条带越弱
从动物组织中提取基因组DNA
使用研钵进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。注)下列组织请加液氮研磨至粉末状。
A.富含DNA酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等组织。
B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C.富含角质蛋白的组织或坚硬的组织(如骨骼)等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl,65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。
适用于PCR研究的快速提取法:
1 田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右,新鲜叶片放于1 5ml离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。
2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5cm长)放在点穴式研板中。
3 加入400μlDNA提取缓冲液,用玻棒将叶组织研细,直到液体变成深绿色即可。
4 再加400μlDNA提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。
5 加400μl氯1仿,混合均匀后,2400×g离心30s,将上清液转入一支新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。
6 加800μl无水乙醇,混匀,2400×g离心3min。弃上清。
7 70%乙醇冲洗,风干。
8 用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃。
9 取1μl用于PCR分析。
以上信息由专业从事随机引物DNA标记的友名生物于2021/7/31 11:22:28发布
转载请注明来源:http://wuhan.mf1288.com/youming-1591355534.html
上一条:便携式流速仪信赖推荐「水测家」