滴加FITC-TSA:滴加FITC-TSA试剂,避光室温反应5min。后TBST洗3次×10min,PBS洗1次×5min。
DAPI复染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。
镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)
滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗。
.滴加生物素化鼠抗地1高辛:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
.苏1木素复染,充分水洗。
酒精脱水,二甲1苯透明,封片。
原位杂交的应用范围:
①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;
②感1染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳1头状瘤1病毒和巨细胞病毒DNA的检测;
③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;
④基因在染色体上的定位;
⑤检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;
⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿1瘤的诊断和生物学剂量测定等。
以上信息由专业从事花芽原位杂交测试服务的科锐诺于2025/2/26 18:00:24发布
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