外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
NTA(Nanoparticle Tracking Analysis)技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一;本实验室所使用的仪器Zetaview包含的微电泳技术,也可进行zeta电位的检测。目前配备为488nm波长的激光器,且搭配对应的滤光片,可以测量荧光抗1体标记的外泌体 。除外泌体以外,本实验室也接收微囊泡、脂质体、蛋白、生物纳米材料等样本。促进组织修复和再生。近年的研究发现,干细1胞来源外泌体是干细1胞旁分泌活动的一种重要方式,可介导其促进组织再生。Chen等发现,ADSCs-exo的联合治1疗可减少大鼠急性缺血性卒中的梗死面积,促进神经功能恢复。ADSCs-exo可以避免干细1胞治1疗的免1疫排斥、伦1理问题等缺点,且具有高稳定性、易于储存、无需增殖、便于定量使用等优势,与单一的细1胞1因子比较,具有较高的安全性和更大的组织再生潜能。外泌体的生物学功能:1、首1次报道的外泌体生物功能是红血球成熟过程中排出来的蛋白质。
2、进一步的研究表明其功能包括排泄不必要的蛋白质和RNA等物质。
3、可促进生物体免1疫应答反应。
4、对凝血和血管生成其促进作用。
5、可通过化学信号参与癌细胞的转移。
6、在哺乳期的免1疫调节过程中起到重要的作用。
7、不仅参与触发下游信号传导,而且特异性靶向受体细胞和交换蛋白。
8、可提供特殊的核酸且起到运输功能。
9、作为细胞-细胞之间传递信息的重要分子。
10、在病毒和朊蛋白等多种病原体之间起着独1特的作用。
以上信息由专业从事外泌体测序检测的科锐诺于2024/12/5 8:18:14发布
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